Uloga Ecto-5'-nukleotidaze (CD73) u regeneraciji i imunomodulaciji humanih mezenhimskih matičnih ćelija koštane srži

Apstrakt

Uvod: Ecto-5’-nukleotidaza (CD73) ima ulogu u modulaciji inflamatornog odgovora kroz regulaciju balansa između ekstracelularnog ATP-a i adenozina, a istovremeno utiče i na regenerativni i migratorni potencijal mezenhimskih matičnih ćelija koštane srži (KS MMĆ), kao i na njihove interakcije unutar koštane srži. Razumevanje uloge CD73 eksprimiranog na KS MMĆ doprineće boljem razumevanju funkcionalnih osobina ovih ćelija, što je važno za razvoj  ćelijske terapije i regenerativne medicine.

 Materijali i metode: KS MMĆ su izolovane iz ilijačne kosti pacijenata. Inhibicija CD73 je postignuta primenom adenozin 5’-(α,β-metilenski) difosfat (APCP). Ćelijska vijabilnost merena je MTT testom. Sekrecija citokina analizirana je protočnom citometrijom. Migratorni potencijal ispitan je metodom ogrebotine (od eng. scratch assay), dok je imunofluorescencija korišćena za evaluaciju citoskeletnih komponenti i lokalizacije proteina. Slike su analizirane fluorescencijskim mikroskopom, a kvantifikacija urađena u ImageJ-u.

 Cilj: Ispitati efekte kratkoročne inhibicije CD73 pomoću APCP na proliferaciju, vijabilnost, diferencijaciju, sekreciju citokina i migraciju KS MMĆ.

 Rezultati: Kratkoročna inhibicija CD73 nije dovela do smanjenja vijabilnosti KS MMĆ, ali je modulirala njihov osteogeni diferencijacioni potencijal. Pokazano je da inhibicija CD73 utiče na sekreciju citokina. Test migracije pokazao je da tretman APCP-om redukuje migratorni kapacitet KS MMĆ. Analize proteina pokazale su smanjenje vimentina, α-SMA i aktina, potvrđujući ulogu CD73 u migraciji KS MMĆ.

 Zaključak: Kratkoročna inhibicija CD73 nije uticala na vitalnost KŠ MMĆ, ali je  smanjila migratorni kapacitet i ekspresiju citoskeletnih proteina. Promena diferencijacije i sekrecije citokina ukazuje na imunomodulatorni pomak, ističući CD73 kao ključnog regulatora KŠ MMĆ sa potencijalnim terapijskim značajem.